Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次造出现胰脏免疫到造出现1HG肝炎诊疗病因的成效率在婴幼儿时期就有很差的说明了，多个胰脏免疫感染性的婴幼儿当中有70%在血清转化后10年内患肝炎，而随访15年的婴幼儿这一数目缩减到84%。即便如此，占到诊疗1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的发病有助于还无法得到充分的研究成果。

越来越多的人开始应用于分期压制系统来定义1HG肝炎的成效：性状在造出现多种胰脏免疫时踏入第1阶段性，造出现食欲异常时踏入第2阶段性，造出现病因时踏入第3阶段性。一些多发胰脏免疫感染性的性状，在1期和2期，成效较快，并转变为发病的1HG肝炎。我们早先说明了了各别在首次检测到多种胰脏免疫筛选后多于10年无肝炎的极快成效者，这分组病患人数少，但特征非常明确。随后，我们找到胰脏自身特异性专一性CD8+T直通粒体质子化以在成效缓快的病患当中基本不存在，但在近期发病和长期存在的肝炎病患当中很很难检测到。这不太可能确实，与成效病患比起，这些病患自身突变的闭环增强。

现代研究成果确实，尽管闭环性T直通粒体(Treg)数量正常，但肝炎病患存在一些动态毛病，其当中仅限于对IL-2的质子化以灵活性增大。此外，肝炎病患当中的波动以CD4+T直通粒体不太可能对闭环更具抵抗性，观感为波动以T直通粒体的依赖性减弱，自然导致的Treg和体外导致的正向Treg，以及特异性经历的CD4+T直通粒体当中IL-2质子化以减弱。本研究成果的目的是说明了了CD4+闭环性T直通粒体(Treg)在这群人极缓快成效者当中的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁以下造出院的病患直系亲属当中检查1HG肝炎的凶险因素。我们早先说明了了长期缓快成效者的特征，他们保持多重胰脏免疫感染性最多10年，但无法造出现肝炎的诊疗病因，快性或非进行时性免疫。随后，10名继续保持无肝炎并愿意提供大量体内筛选的缓快成效者归入T和B直通粒体动态归纳。在现阶段的研究成果当中，8名快成效者(SP分组)，当中位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏免疫感染性。所有的发起者都位处1HG肝炎成效的1期，尽管一些人随后丧失了胰脏免疫对某些特异性的感染性质子化以，然而，一名病患仍未位处2期多于6年，但无法造出现诊疗病因，一名病患被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集实验筛选时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳当中对该小分子进行时了单独风险评估。剥离外周血单个氢直通粒体(PBMCs)，采用多参数流式直通粒体心法和T直通粒体依赖性试验风险评估小分子当中Treg的频带、表HG和动态。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和回归)进行时无督导聚类归纳，风险评估Treg表HG。

结果：与身心健康小分子比起，来自快成效体的知觉CD4+T直通粒体的督导聚类确实，转录的知觉CD4+ Treg频带缩减，与糖皮质激素正向的TNFR相关肽(GITR)暗示缩减有关。一名HbA1c急剧下降的病患与成效缓快者和转换的对照分组比起，Treg序有所不同。动态归纳确实，与身心健康小分子比起，来自缓快成效体的Treg内源性的CD4+波动以T直通粒体依赖性明显受损。观感为对波动以CD4+T直通粒体CD25和CD134暗示的依赖性缩减。

布1 有系统的表HG归纳确实，CD4+Treg亚HG在快成效队列当中缩减。由FlowSOM转化的Treg四楼，汇聚在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -直通粒体上。根据标上物暗示鉴定造出10个元簇:知觉T直通粒体_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T直通粒体;HLA-DR + GITR +知觉T直通粒体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标上转化的10个元簇的MST。每个键值推选一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在键值分组周围上色。每个键值当中的煎饼布对此单个标上的暗示层级。(b)每个元聚类的热布，以确实整体标上暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对于总质量为每个metacluster装直通布(总质量> 0.05%)确定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T直通粒体(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T直通粒体(l)。粉红色圆点推选理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 应用于CITRUS的预测模HG声称，Treg频带的缩减是成效缓快的标志。分级门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP发起者和转换的HD发起者在CD4+CD45RA−T直通粒体上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的推选性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示进行时剥离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(外缘)和SP(虎纹)分组以及小分子SP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的频带汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的装直通布;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)玉米簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示风力渐变，箭头突造出的簇被识别为SP和HD队列之间的不同。(j)装直通布确实了在SP(虎纹)和HD(灰点)分组当中，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对于总质量(数目)。(k)直方布确实每个簇的表HG(粉红色)和Treg标上相对于暗示与故事情节暗示(红色);上列，存储器Treg_3;示意图一行，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇当中标上的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

布3 与身心健康献血者比起，成效缓快者知觉treg的GITR缩减。每个知觉CD4+T直通粒体元簇(知觉T直通粒体_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T直通粒体;HLA-DR + GITR +知觉T直通粒体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个暗示标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热布(sp606不仅限于在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR暗示接在，确实直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(粉红色)所有小分子仅限于，p< 0.05(红色)小分子SP 606和转换的HD不仅限于在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(粉红色)接在，确实直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

布4 来自缓快成效的CD4+ treg直通粒体压制波动以CD4+T直通粒体的灵活性增大。SP分组用红色的直通和圆点对此，HD分组用金色的直通和圆点对此，粉红色的直通/圆点对此小分子sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒体进行时分选。CD4+CD25−(应以答者)被标上为CFSE, Treg按注意到的数目校准。用抗CD3 /28微珠重置直通粒体，培育造出3同一天进行时流式直通粒体心法检测。(a-d)与CD4+应以答者相对于应以的treg培育造出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者培育造出。(a,b,f) CFSE直通粒体分裂(a,e)和CFSE依赖性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百份。应用于感染性对照(转录的号召直通粒体则有treg)计数依赖性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 波动以CD4+T直通粒体对缓快成效的T直通粒体重置的依赖性更恰当。SP分组用红色的直通和圆点对此，HD分组用金色的直通和圆点对此，粉红色的直通/圆点对此小分子sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒体进行时分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel标上，treg按注意到的数目校准。用抗CD3 /28微珠重置直通粒体，培育造出3同一天进行时流式直通粒体心法(CD25反染)和直通粒体因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者共同培育造出。(a,b) CFSE直通粒体分裂(a)和CFSE依赖性百分比(b)。(c,d) CD25依赖性百分比(c)和CD134依赖性百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育造出当中的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得造出的结论是，来自缓快成效子的重置知觉CD4+Treg在GITR暗示当中得到了扩展到和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1HG肝炎风险性状当中的异质性的必要性。

原文造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28